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CDCD级实验动物猪企业标准-南京洲邦生物科技有限公司实验动物研究所
作者:佚名    文章来源:本站原创    点击数:1195    更新时间:2015/5/3    

 

1  范围

本标准规定了CDCD级实验动物猪的术语和定义、培育方法、所控制的疾病的种类、病原和病原的检测发方法。

本标准适用于供动物实验生物制剂及生命科学研究用猪以及养猪场的病原控制与监测。

2 CDCD级实验用猪  (CDCD) experimental pig

不携带所规定的重要人兽共患病病原、猪烈性传染病病原以及不携带所规定的对猪危害大和对科学研究干扰大的病原的实验用猪。

3 品种分类

CDCD级实验用纯种巴马猪、二花脸猪

不携带所规定的重要人兽共患病病原、猪烈性传染病病原以及不携带所规定的对猪危害大和对科学研究干扰大的病原的纯种巴马猪、二花脸猪。

  CDCD级实验用杂交猪

不携带所规定的重要人兽共患病病原、猪烈性传染病病原以及不携带所规定的对猪危害大和对科学研究干扰大的病原二元、三元杂交猪。

4  病原控制范围

实验室检测没有猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine  reproductive  and  respiratory  syndrome virus )、猪瘟病毒(Classical swinefever virus)、乙型脑炎病毒( Japanese encephalitis virus)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus 、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)、猪细小病毒 Porcine parvovirus )、皮肤病原真菌( Pathogenic dermal fungi),体外寄生虫(Ectoparasites)、弓形虫(Toxoplasma gondii)。

5   母猪的筛选、隔离环境控制

母猪来源于未注射PRRS疫苗、猪伪狂犬疫苗、猪瘟疫苗,临床上无经胎盘垂直传播的疾病,即猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬、猪细小病毒病等症状的二胎以上经产猪。现场采集样本,检测猪繁殖与呼吸综合征病、猪瘟和猪伪狂犬病三种主要疾病,上述三种病均检查血清抗体。三种疾病均为阴性的猪运至隔离舍封群饲养。

新生仔猪不吃初乳,1日龄隔离人工饲养。生产场区以屏障系统或严格与外界隔离,饲料定制,用专用车辆运输,入舍前去除外包装。饮水按GB 5749执行。

6 检测要求及方法

6.1 检测要求

6.1.1 检测频率

    21日龄及60日龄检测一次,此后每 6 个月至少检测一次。

6.1.2 检测数量

根据实验用小型猪群体大小,抽样数量见表1

1 抽样数量

群体大小(头)

抽样数量

100

不少于 5

100500

不少于 10

500

不少于 15

 

6.1.3样本要求

样本要求有明显标识,写明检品名称、品系、等级、数量及检测项目等内容,安全送达实验室。

6.2采样方法

按照NY/T 541 规定的采样方法采样。

6.3检测方法

6.3.1 临床观察

临床检测外观无异常。

6.3.2 猪繁殖与呼吸综合征抗体检测

IDEXX生产的猪繁殖与呼吸综合征血清抗体检测试剂盒,按说明书进行检测。

6.3.3 猪瘟抗体检测

IDEXX生产的猪瘟血清抗体检测试剂盒,按说明书进行检测。

6.3.4 乙型脑炎病毒抗体检测

IDEXX生产的乙型脑炎病毒血清抗体检测试剂盒,按说明书进行检测。

6.3.5猪伪狂犬GB抗体检测

IDEXX生产的猪伪狂犬GB抗体检测试剂盒,按说明书进行检测。

6.3.6 猪肺炎支原体抗体检测

IDEXX生产的猪肺炎支原体血清抗体检测试剂盒,按说明书进行检测。

6.3.6 猪细小病毒抗体检测

IDEXX生产的猪细小病毒抗体检测试剂盒,按说明书进行检测。

6.3.7 皮肤病原真菌检测

  GB/T 14926.4规定方法进行检测。

6.3.8 体外寄生虫检测

     GB/T 18448.1规定方法进行检测。

6.3.9 弓形虫检测

GB/T 18448.2规定方法进行检测。

6.3.10猪圆环病毒2型抗体检测  按附录 A规定方法进行检测。

 

7 结果判定

 抗体检查  血清抗体阴性判为合格。

 虫体、虫卵检查  虫体和虫卵均未检出,判为合格。

判定结论   所有项目的检测结果均合格,判为CDCD级标准。否则,判为不符合CDCD级标准。                                           

 

    A

猪圆环病毒 2 ELISA 抗体检测

A.1  原理

采用猪圆环病毒2ORF2合成肽抗原包被微孔板,加入稀释的待检血清,经温育后,若样品中含有

特异性抗体, 则将与微孔板上抗原结合, 经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后, 加入酶标二抗,与微

孔板上抗原抗体复合物发生特异性结合,再经洗涤除去未结合的酶标二抗,在孔中加入TMB底物液,与

酶反应产生蓝色产物,加入HF溶液终止反应后,用酶标仪630nm波长测定各反应孔中的OD值。

A.2  样品采集

A.2.1  样品类型

猪血清。

A.2.2  样品采集

无菌条件下用一次性注射器取耳静脉血3mL5mL,置于试管中,分离血清,待检。

A.3  操作步骤

A.3.1  用样品稀释液将待检样品40倍稀释后加入预包被的抗原板孔中,每孔加100μl。阴、阳性对照

各设2孔, 每孔100μl 另设一空白对照孔, 空白对照孔加100μl稀释液。 轻轻振匀孔中样品 (勿溢出)

37温育30min

A.3.2  甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗板3次,300μl/孔,每次静置3min后倒掉,最后一次洗涤后在

干净吸水纸上拍干。

A.3.3  每孔加酶标二抗(抗猪IgG-HRP结合物)100μl,置37温育30min

A.3.4  洗涤3次,方法同A.3.2

A.3.5  每孔加底物A液、B液各50μl,混匀,室温避光显色10min

A.3.6  每孔加终止液50μl10min内测定结果。

A.4  结果判定

A.4.1  肉眼判定

“++++”深度蓝色,液体不透明; “+++”蓝色,液体微透明; “++”中度蓝色,液体透光; “+”

蓝色,液体透明;无色,液体完全透明。以显色“++”以上判为阳性。

A.4.2  酶标仪判定

A.4.2.1  以空白孔调零,在酶标仪上测各孔OD630值。试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630≥0.

6,阴性对照孔平均OD630值<0.2

 

 

 

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